规模化猪场仔猪流行性腹泻的诊断与防控

规模化猪场仔猪流行性腹泻的诊断与防控

贾佩¹，周宏超^2∗

(1．陕西正能农牧科技有限责任公司，农业农村部西北生猪良种繁育重点实验室，陕西高陵 710201；2．西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌  712100)

摘 要：2023年1月26日，陕西省某规模化母猪场产房14日龄仔猪发生腹泻，腹泻仔猪以呕吐、水样黄色粪便消瘦脱水高病死率为主要临床症状，发病率高达35％，抗生素治疗无效，病情迅速传播至其他生产线。根据仔猪临床症状、剖检大体病理变化和兽医实验室检测结果诊断为猪流行性腹泻。针对该诊断结果，该场实施仔猪流行性腹泻弱毒疫苗和灭活疫苗的跟胎免疫、生物安全管控、仔猪提前断奶及其他生产防控措施，并对该场的生产成绩和猪群健康进行为期5周的跟踪，通过持续的检测分析来评估防控效果。结果显示，综合防控措施实施后5周猪群猪流行性腹泻的发生得以控制，猪群恢复健康，生产成绩趋于稳定。说明案例中猪流行性腹泻综合防控方案有效。

关键词：猪流行性腹泻；诊断；防控；仔猪

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epizootic diarrhea virus，PEDV)引起的急性高度接触性腹泻性疾病^[1]。发病猪只以不食、呕吐、腹泻和脱水死亡为主要临床特征，各年龄阶段猪只均可感染，尤其是５日龄内仔猪，病死率可高达100％^[3]，给养猪业造成巨大经济损失｡

陕西省某规模化母猪场存栏基础母猪4 800头(分4条线独立生产，每条线基础母猪存栏1200头)，场内实行批次化管理，每间隔9 d分娩一批仔猪。2023年1月26日1线产房14日龄仔猪发生大规模黄色水样腹泻。腹泻仔猪以呕吐､水样粪便､眼窝塌陷､脱水扎堆为临床症状。病情迅速扩散到2､3､4条线产房。为调查病因，一线工作人员将腹泻猪群的临床症状反馈给兽医，并选择5头腹泻症状仔猪送至兽医检测实验室进行病因的诊断检测。结合猪群临床表现､腹泻病猪的剖检病理变化和检测结果，确诊该场仔猪腹泻为猪流行性腹泻病毒引起的疫病。本文通过总结规模化猪场仔猪PED的诊断､防控及防控效果评估，以期为规模化猪场仔猪PED的防控提供参考。

1  材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂

PEDV抗体检测试剂盒(22135)和PEDVq PCR检测试剂盒(230018)，北京爱德士元亨生物科技有限公司产品；科牧丰磁珠法核酸提取试剂(32A6)，北京科牧丰生物科技有限公司产品；德尔塔冠状病毒检测试剂盒､轮状病毒检测试剂盒､传染性胃肠炎病毒检测试剂盒均，湖南润美生物科技有限公司产品。所有样品的检测试剂均为同批次试剂盒，试剂均在规定有效期内使用，PEDV抗体试剂盒置于4 ℃冰箱冷藏保存备用，核酸提取试剂置于常温保存备用，PEDV扩增试剂盒､德尔塔冠状病毒检测试剂盒､轮状病毒检测试剂盒､传染性胃肠炎病毒检测试剂盒置于-25 ℃冷冻保存。

1.1.2 主要仪器

-25 ℃冰箱(YCDG265)，澳柯玛股份有限公司产品；离心机(D3024)，大龙医疗设备有限公司产品；离心管架；加样槽；电热恒温箱(DHPG2)，上海一恒科技有限公司产品；移液器和酶标仪，赛默飞世尔科技公司产品；荧光定量PCR仪，北京爱德士元亨生物科技有限公司；核酸提取仪，北京科牧丰生物制药有限公司。

1.2 方法

1.2.1 临床症状和剖检

对于猪群发病情况和临床表现进行问诊和视诊。对2 h内腹泻致死猪只剖检进行大体病理学观察。

1.2.2 样品采集与检测

采集腹泻仔猪呕吐物､粪便､病弱猪肠道组织样本､产床环境样本及产房工具。参照核酸提取试剂盒说明书进行PEDV RNA的提取。以提取的RNA为模板按照PEDV检测试剂盒说明书进行PEDV扩增，反应参数为：50 ℃ 15 min；95 ℃ 1 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，45个循环。在60 ℃步骤之后记录荧光信号。FAM通道Ct值≤45为阳性，FAM通道无Ct值为阴性。

1.2.3 抗体检测

参照爱德士PEDV抗体检测试剂盒说明书，操作程序为：血清样品稀释(40倍稀释)G抗原孵育(60 min)G洗板G酶标二抗孵育(60min)G洗板G显色(15min)G终止G读数；试验结果计算及判断标准：在650nm处读取阴阳性对照和每个样品的OD值，在试验成立的情况下(阴性对照OD值<0.2)，计算每个样本的S/P值，若S/P值<0.5为阴性，若S/P值≥0.5为阳性。对于试验不成立的实验样本需重新进行试验。

2  结果

2.1 发病情况与剖检结果

对发生腹泻栋舍猪群进行巡栏，腹泻仔猪产床有黄白色呕吐物，腹泻仔猪肛门和后肢污染有黄色稀粪。挑选5头腹泻瘦弱仔猪进行剖检，发现5头腹泻瘦弱猪只肠壁(十二指至结肠)薄而透明，肠腔内积聚黄色液体(图1)。

A．仔猪呕吐；B．后肢污染黄色稀粪的仔猪；C．腹泻猪肠腔积聚黄色液体

A．Piglet vomiting；B．Piglets with yellow feces contaminated in their hind limbs；C．Yellow liquid accumulation in the intestinal cavity of diarrhea piglet

图１ 腹泻仔猪的临床症状及剖检情况

Fig.１ Clinical symptoms and anatomy of diarrhea piglets

2.2 实验室诊断

2.2.1 病原检测

对采集的腹泻仔猪呕吐物､粪便､病弱猪肠道组织样本､产床环境样本及产房工具(1~5号样本)进行PEDV病原qPCR试验。结果显示，阳性对照具有标准“S”型扩增曲线且Ct值=28.04，阴性对照FAM通道无“S”型扩增曲线且无Ct值，1~5号样本检测结果均为PEDV阳性，样本对应的FAM通道有标准“S”型扩增曲线且Ct值<38(图2)，传染性胃肠炎病毒､轮状病毒､德尔塔冠状病毒检测结果均为阴性。

2.2.2 毒株测序

将该猪场PEDV阳性样本测序序列毒株命名为230280G1，测序的PEDVS基因序列和国内外代表毒株序列用生物信息学软件DNASTAR和MEGA7进行同源性比对和系统进化树构建。结果表明该毒株S基因与SXSL的基因相似性为99.5％，230280G1处在SXSL(2020)的分支上(图3和图4)。

2.3 诊断结果

根据猪群临床表现，发病猪临床症状，死亡猪的剖检变化及实验室检测结果分析，该病例为PEDV引起的仔猪腹泻。

2.4 防控方案

依据猪群临床症状对猪场内各阶段猪群做疾病感染评估，并按照生物安全等级分区并封锁，严禁生猪调运､人员出入､车辆出入及饲养栋舍人员隔离。对于腹泻产房仔猪进行生产价值评估，无生产价值病仔猪第一时间淘汰并做无害化处理。分娩后腹泻母猪在隔离舍隔离处理，待腹泻症状恢复后重新入群。对于场区环境1∶200过硫酸氢钾溶液消毒，每天3次。栋舍用5％过氧化氢溶液带猪消毒，消毒后栋舍用密斯陀喷洒干燥。

适当提高产房温度，保温箱温度维持在32～34 ℃。禁止调栏和寄养，产床放置添加庆大霉素补液盐的料盘和含有代乳粉与教槽料的料盘，辅助仔猪提前适应断奶并减少脱水情况。对于产前5周母猪免疫流行性腹泻弱毒疫苗和流行性腹泻灭活疫苗各1头份/头､产前2周母猪和产前1周母猪进行流行性腹泻灭活疫苗口服和流行性腹泻灭活疫苗肌注各2 mL/头。妊娠母猪､后备母猪和诱情公猪免疫流行性腹泻弱毒疫苗1头份/头和流行性腹泻灭活疫苗2 mL/头。

2.5 防控效果评估

2.5.1 生产成绩

对发生PED后的5个批次生产成绩进行跟踪(表1)，48批分娩仔猪为首次发生PED的猪群，PED发生时仔猪日龄较大，损失相对较少，仔猪损失率大约10.4％。49批次至52批次的仔猪损失率分别为49.1％､92.6％､86％､3.54％。53批的仔猪群未发生PED。

2.5.2 免疫后猪群抗体水平

在全群免疫前和免疫后3周对全群各阶段猪只随机采血60份，进行PEDV抗体检测(表2)，5个阶段猪群的PEDV抗体水平在免疫后3周均有所升高，抗体阳性率也从免疫前的低水平(0~35％)升高到100％。

2.5.3 防控后猪群排毒情况

对分娩前10 d待分娩批次母猪随机选择30头进行口鼻肛拭子采样监测PEDV病原(表3)。防控后60批次前的待分娩母猪均存在带毒生产情况，61批次后猪群排毒情况消失，整个猪群的排毒期大约2月。

４  讨论

PED是危害养猪业的重要疫病之一^[4-5]，可感染各年龄阶段的猪。３日龄内仔猪发生PED病死率可高达100％^[6-7]｡育肥猪感染后虽无死亡发生，但会影响育肥猪生长性能^[8]。该病严重制约我国养猪业的发展。

PED的临床防控应从消灭传染源、切断传播途径和保护易感动物三个方面着手，消灭传染源要从引种的源头做起^[9]。切断传播途径可从生物安全防控着手：用生石灰、消毒盆和人员的洗澡换衣等生物安全措施建立疫病防控的隔离带。易感动物的消除和保护措施包括防止霉变饲料的饲喂、日粮配方科学合理、无应激、加强饲养管理水平、疫苗免疫提高猪群感染阈值等等。

近年来，PEDG2c毒株和重组G2d毒株成为主要的流行毒株，疫苗经典毒株对新型毒株的保护力有限^[10]。也有研究表明，经典毒株灭活疫苗在母猪产前30d和15 d进行免疫后，母猪血清及初乳中可产生高水平稳定的IgA、IgG及中和抗体^[11]；母猪口服PEDV活病毒可引起PEDV特异性IGA效应，能提高母乳抗体水平^[12]；可见，疫苗仍是PED预防和控制的主要措施。1 mL感染PED的仔猪排泄物中所含病毒量可感染300万头猪^[13]，产房仔猪一旦发生腹泻10日龄以上仔猪应立即转走，3日龄以下仔猪处死，以此减少产房环境病毒载量，并且第一时间洗消，处理和干燥。PED的防控措施还有多种，如自家苗的紧急接种，氯硝柳胺等抑制病毒活性的药物使用，优化免疫程序^[14]等。本文在PEDV防控中以商品化疫苗的口服和免疫为主，生物安全管控为辅的综合防控措施成功控制规模化猪场的PED疫情。

参考文献：略

本文摘自《动物医学进展》2024年第45卷第9期(总第375期)：133-137